分枝杆菌分离培养检查法
1、培养基
改良罗氏培养基：
谷氨酸钠7.2g 磷酸二氢钾2.4g 硫酸镁0.24g 柠檬酸镁0.6g 丙三醇12mL 蒸馏水600mL 新鲜鸡卵液1000mL 2％孔雀绿水溶液20mL
制备方法：
基础液制备：量取蒸馏水600mL，加入各无机盐成分、谷氨酸钠和丙三醇，溶解后，沸水浴
1h使呈糊状，冷却。
新鲜鸡卵液制备：新鲜鸡卵经自来水清洗、肥皂水刷洗干净表面，待干后浸泡于75％乙醇或其他稀释消毒液中20min～30min，通过消毒的纱布过滤收集鸡卵液，搅匀。
改良罗氏培养基制备：将600mL基础液和l000mL新鲜鸡卵液混匀。加入2％孔雀绿水溶液20mL
，混匀，静置1h后，分装至标准螺旋盖培养管或灭菌试管中，每管7mL；培养基斜面应占试管的2/3，不多于两层放置于搁架中，经培养基蒸气凝固灭菌器
85℃凝固灭菌50min。制成的培养基应斜面鲜艳，表面光滑，有一定韧性和酸碱缓冲能力。制备好的培养基37℃无菌试验24h，检查培养基污染情况后置4℃避光保存，1个月内使用。
丙酮酸钠培养基：成分与改良罗氏培养基基本相同，除去甘油，加丙酮酸钠1.6g，用10％氢氧化钠调整至pH7．2，加葡萄糖49，其他同改良罗氏培养基制备法。
酸性罗氏培养基：成分与改良罗氏培养基相同，把其中的磷酸二氢钾增加至
149，其他同改良罗氏培养基制备法。
2、前处理方法
简单法(用于酸性罗氏培养基) 4％氢氧化钠，取49氢氧化钠，溶于80mL蒸馏水内，待全部溶解后加蒸馏水至100mL。 处理方法：取痰标本，视标本性状加入1～2倍体积的4％氢氧化钠于痰瓶中，拧紧螺旋盖，涡旋振荡器上振荡1min，使痰液充分匀化，室温放置；自加入氢氧化钠消化液起，整个处理时间应在15min～20min。
中和离心法(用于改良罗氏培养基) 消化液N一乙酰一L-半胱氨酸(NALC)一．NaOH：50mL8％NaOH与50mL2.94％枸橼酸钠混合，临用前加人0.5g N一乙酰一L_半胱氨酸混匀。
处理方法：取痰标本置于50mL离心管中，加入等量的消化液，拧紧螺旋盖，涡旋振荡器上振荡1min，使痰液充分匀化，室温放置20min后，加入磷酸盐缓冲液(pH6.8，0.067mol／L)至50mL，3 000×g离心20min，弃上清，加入1mL～2mL磷酸盐缓冲液(pH6.8，0.067mol／L)，混悬。
3、接种和培养
取消化后痰液混匀，用无菌吸管取标本0.1mL，均匀接种在整个培养基斜面，每份标本接种
2支培养基，接种后斜面向上于37℃恒温培养箱内。
4、结果报告
接种后应每周观察细菌生长情况，阳性生长者经涂片萋一尼氏染色法验证后随时报告结果，培养至8周仍未见细菌生长者，报告分枝杆菌培养阴性；应于接种后第3天和第7
天各观察一次菌落生长情况，发现菌落生长者，经萋一尼氏染色法证实后，可报告快速生长分枝杆菌阳性，此后每周观察一次，记录菌落生长及污染情况。观察时发现非分枝杆菌生长，应报告污染。
按下列标准报告培养结果：
—分枝杆菌培养阴性(一)：培养8周未见菌落生长者。
—分枝杆菌培养阳性(+)：培养基斜面菌落分散生长，占据斜面面积的1／4以下者。
—分枝杆菌培养阳性(++)：培养基斜面菌落分散生长，占据斜面面积的1／2以下者。
—分枝杆菌培养阳性(+++)：培养基斜面菌落密集生长或部分融合，占据斜面面积的3／4以下者。
—分枝杆菌培养阳性(++++)：培养基斜面菌落密集生长呈苔样分布，占据全斜面者。
培养基培养基污染情况报告
观察时发现非分枝杆菌生长时，应报告污染。污染率高于5
％时，提示培养基制备、标本前处理或接种等环节有误，应认真检查操作程序，采取相应措施。