狂犬病是由狂犬病毒所致的急性传染病,对人体危害很大,接种狂犬病疫苗是预防感染狂犬病的主要方法,所以疫苗的质量非常重要,需要进行效价检测。
一、检测方法:NIH法
二、原理:本法是将供试品免疫小鼠后产生相应的抗体,通过小鼠抗体水平的变化来测定供试品的免疫原性
三、试剂:稀释液(pbs)量取0.9%磷酸二氢钾溶液75ml,2.4%磷酸氢二钠溶液425ml,8.5%的氯化钠溶液500ml,混合后加水至5000ml,调PH值至7.2-8.0
四:攻击毒株CVS制备:启开毒种,稀释成10-2悬液,接种10-12g的小鼠不少于8只,每只脑内接种0.03ml,连续传2-3代,选择接种4-5天有典型狂犬病症状的小鼠脑组织,研磨后加入含2%马血清或新生牛血清制成20%悬液,经每分钟1000转离心10分钟,取上清液经病毒滴定及无菌检测符合规定后作攻击毒用
五、参考疫苗的稀释和供试品溶液的制备
六、实验步骤:1、用不同稀释度的供试品及参考疫苗分别免疫16只小鼠,每只小鼠腹腔注射0.5ml,间隔一周再免疫一次2、第一次免疫14天后,用经预先测定的5——100LD50的病毒量进行脑内攻击3、小鼠攻击后逐日观察14天,并记录死亡情况,统计第5天后死亡和呈典型狂犬病脑症状的小鼠
七、附注:1、动物免疫时疫苗保存在冰浴中 2、各组动物应在同种条件下饲养 3、攻击毒原病毒液注射的小鼠应80%以上死亡
八:设备的使用
产品名称 | 产品作用 |
超净工作台 | 为效价检测提供无菌无尘的环境 |
PH计/酸度计 | 稀释液制备时精确测定溶液ph值 |
离心机 | 在攻击毒株CVS制备时使用,利用离心力,将各组分分离 |
制冰机 | 动物免疫时要将疫苗保存在冰浴中,制冰机可提供这种环境 |
高压蒸汽灭菌器 | 用于试验过程中检测器具、试剂、稀释剂的灭菌 |
纯水机和超纯水机 | 用于试剂的稀释配制
|