1.无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
2.营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因子等）
3.血清和血浆 (提供细胞生长必须的营养成份)
4.温度和pH（36.5±0.5℃，7.2~7.4）
5.气体环境（95%的空气+5%CO2的混合气体）
其中5%CO2气体是为保持培养液的pH稳定
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